G418 Sulfate（G418硫酸鹽），也稱作Geneticin（遺傳霉素），是一種結(jié)構(gòu)類似于慶大mei素B1（Gentamycin B1）的氨基糖苷類抗生素，G418 Sulfate(Geneticin) 遺傳霉素通過影響80S核糖體功能和阻斷延伸步驟來干擾蛋白合成，對原核和真核等細(xì)胞都有毒性，包括細(xì)菌、酵母、高等植物和哺乳動物細(xì)胞，也包括原生動物和蠕蟲。其抗性基因（主要為neo基因）位于轉(zhuǎn)座子Tn601（903）或Tn5（來源于細(xì)菌），但是可以在真核細(xì)胞中表達(dá)。通過基因重組技術(shù)將這些抗性基因?qū)爰?xì)胞，使其獲得對G418的耐藥性，從而用來篩選和維持培養(yǎng)攜帶抗性基因的原核或者真核細(xì)胞。 哺乳動物細(xì)胞中，當(dāng)抗性基因neo被整合進(jìn)真核細(xì)胞基因組后，使其編碼表達(dá)氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶（amino-glycoside 3’-phosphotransferase，APH(3')II）。此酶通過共價修飾G418的氨基或羥基功能，抑制抗生素-核糖體間的相互作用，從而使得抗生素失活。這一特性賦予細(xì)胞產(chǎn)生抗性。穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株篩選實驗，需要建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）確定殺死無抗性細(xì)胞的zui低有效濃度。 植物細(xì)胞中，通過轉(zhuǎn)染攜帶nptII基因的抗性質(zhì)粒孵育其抗性。nptII基因也能編碼表達(dá)氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶，這個酶使得多種抗生素喪失活性，包括G418，卡那mei素和巴龍mei素。
使用說明
1. G418儲存液的配制（50 mg/mL，活性濃度）
（1）活力單位的換算
根據(jù)此公式進(jìn)行換算：（1000/A0）×A1=A2，其中A0是G418的活力值（Potency），因批次而異。可見批次對應(yīng)的質(zhì)檢報告，或者瓶子上的標(biāo)簽。A1是想配制的活性G418濃度。A2是實際稱重的粉末與體積比濃度。
比如若所用批次的G418 活力值為：750 ?g/mg，要配制50 mg/mL的G418活性濃度，則實際要配制的粉末濃度為1000/750×50 mg/mL=66.33 mg/mL。
如果配制10 mL的G418儲存液（活性濃度，50 mg/mL），則需要稱取663.3 mg粉末。
（2）除菌和保存
根據(jù)上述換算得到的實際粉末稱重量，加入10 mL無菌去離子水內(nèi)使其wan全溶解。
先用5 mL無菌去離子水預(yù)濕潤0.22 μm針頭式過濾器，除盡水。之后使用此濾器過濾，除菌后分裝成單次使用的小量（如1mL）放到-20℃凍存，1年穩(wěn)定。
【注】
①不要對混濁的溶液進(jìn)行過濾，因為混濁的溶液意味著未wan全溶解，過濾過程中會造成藥物損失，降低終液的活性。
②不建議使用液體培養(yǎng)基，NaCl，磷酸鹽溶液或者有機(jī)溶劑來制備儲存液。
2. 常用篩選濃度
一般來說，剛開始篩選轉(zhuǎn)化子需要高濃度的G418，并用一個較低濃度的G418用于維持培養(yǎng)。生長條件，細(xì)胞類型和其他的環(huán)境因素都可能影響G418的用量，因此第一次使用的實驗體系建議通過殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。
通常情況，哺乳動物細(xì)胞篩選范圍200-2000 μg/mL；植物細(xì)胞：10-100 μg/mL；酵母細(xì)胞：500-1000 μg/mL。
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