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        上海篤瑪生物科技有限公司

        檢測認證人脈交流通訊錄

        篤瑪 石榴皮鞣素 說明書

        • 這真不是您需要的產(chǎn)品?
        • 品  牌:
        • DM
        • 主要規(guī)格:
        • 10mg
        • 用  途:
        • 科研
          • 石榴皮鞣素 操作步驟 試管法(改良 Mayer 法) 1、致敏羊紅細胞: 2%綿羊紅細胞加等量稀釋后的溶血素( 1:2000),混勻,置 37℃水浴 30min。 2、稀釋血清:待測血清 0.2ml,加應(yīng)用液 3.8ml,稀釋度為 1:20。 3、配制溶血標準管:全溶血管:2%綿羊紅細胞 2ml 加 8ml 蒸餾水,混勻。 50%溶血管:取全溶血管液 2ml 加緩沖液 2ml。 4、按表所示,依次加各成分于試管中,混勻,置 37℃水浴 30min, 第 10 管為非溶血對照:補體 CH50 測定試管法 5、結(jié)果測定:取出試管, 2000r/min 離心 10min,對照管應(yīng)不溶血。肉眼比色,選與 50%溶血標準管相近二管,再用分光光度計測(波長 542nm、 0.5cm 比色杯) OD 值, 確定與標準管最接近者為終點管,然后按下公式計算 CH50 值: 血清補體 CH50( U/ml) =( 1/血清用量)×稀釋度。 如第 5 管為終點管,測待測血清中CH50為66.7U/ml。血清補體CH50正常值為50-100U/ml。 石榴皮鞣素 標本要求 1. 血清: 室溫血液自然凝固10-20 分鐘后,離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保 存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。 2. 血漿: 應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20 分鐘后,離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成應(yīng)再次離心。 3.尿液: 用無菌管收集。離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀 形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。 4.細胞培養(yǎng)上清: 檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。 5.培養(yǎng)細胞: 檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100 萬/ml 左右。 通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20 分鐘左 右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。 6.組織標本: 切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨? 后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻 漿器將標本勻漿化。離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢 測,其余冷凍備用。 7.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進 行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融 8.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 石榴皮鞣素 試驗操作中可能影響結(jié)果的原因及其相應(yīng)的解決辦法 1 選擇試劑 選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡至少30分鐘。 2 加樣 可能原因: 1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣; 2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。解決辦法: 1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2) 加樣后及時放入孵箱。 3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。 4) 如果采用AT或其他全自動加樣,最好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5) 標本較多時,請分批操作。 3 孵育 可能原因: 1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗徹底; 2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗徹底。解決辦法: 1) 貼封片或加蓋; 2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。 4 洗板 可能原因: 1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不徹底;洗板針堵塞,抽吸不完全;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。 3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法: 1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后最好在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干; 2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。 5 顯色 可能原因: 1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑; 2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法: 1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流; 3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。 6 終止 可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。 7 讀板 如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標板清潔。 在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸;盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時做好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量。 溫馨提示:不可用于臨床治療。

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